甲氨蝶呤具有广谱抗肿瘤活性，能够单独应用，或者与其他的化疗药物结合运用。普通它的顺应症还是比较普遍的。第一、它能够用于抗肿瘤治疗单独运用，比方乳腺癌、绒毛膜癌、恶性葡萄胎或葡萄胎。第二、它也能够结合应用抗肿瘤治疗，比方急性白血病、伯基特淋巴瘤、晚期淋巴肉瘤等等。第三、大剂量治疗，或者与其他的化疗药物结合应用治疗成骨肉瘤、急性白血病、支气管肺癌，或者头颈部上皮癌等等。

大剂量甲氨蝶呤应用的时分，必需应用甲酰四氢叶酸停止挽救。其作用原理是四氢叶酸是体内合成嘌呤核苷酸和嘧啶脱氧核苷酸的重要辅酶，本品作为一种叶酸复原酶抑止剂主要抑止二氢叶酸复原酶，而使二氢叶酸不能复原成有生理活性的四氢叶酸，从而使嘌呤核苷酸和嘧啶脱氧核苷酸的生物合成过程中一碳基团的转移作用受阻，招致DNA的生物合成遭到抑止。此外本品也有对胸腺核苷酸合成酶的抑止作用，但抑止RNA与蛋白质合成的作用较弱。本品主要用于细胞周期的S期，属于细胞周期特异性药物，关于G1/S期的细胞有延缓作用，对G1期细胞的作用较弱。

甲氨蝶呤片的反作用普通有胃肠道反响、肝功用损伤等。胃肠道反响，包括口腔炎、口腔溃疡、消化道出血、食欲不振、偶见假膜性或出血性肠炎等。肝功用损伤，包括黄疸、丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、γ谷氨酰转肽酶等，长期口服可招致肝细胞坏死、脂肪肝纤维化以至肝硬化。大剂量运用时，可因本品及其代谢产物在肾小管堆积而发作高尿酸血症肾病，此时可呈现血尿、蛋白尿、少尿、肝性贫血以至尿毒症。